تشخیص کمی میزان تقلبات بافتهای طیور در پودر ماهی با استفاده از تکنیک real-time pcr

تغذیه و امنیت غذایی بی شک یکی از مهمترین موضوع های مورد بحث دنیای امروز و سازمان تجارت جهانی است. با توجه به ارتباط مستقیم بین سلامت خوراک دام با سلامت غذای انسان، ضرورت دارد که تولید خوراک دام به عنوان حلقه ای از زنجیره ی تولید غذای انسان مورد توجه قرار گیرد. در این تحقیق پرایمر با طول bp 91 از منطقه 12s rrna میتوکندریایی طراحی و blast گردید و بررسی صحت آن با استفاده از نرم افزار clc انجام گرفت. قطعه ی 91 جفت بازی تکثیر شده از جایگاه ژنی 12s rrna در داخل ناقل ptz57r/t همسان سازی شد و در ادامه پلاسمید نوترکیب استخراج و به عنوان dna استاندارد مورد استفاده قرار گرفت. جهت کمی سازی نمونه ها بصورت درصد تقلب، ساخت استاندارد تقلب با استفاده از مخلوط پودر ماهی خالص و پودر بافت طیور در مقادیر 1، 10 و 20 درصد انجام گرفت. نتایج با استفاده از منحنی استاندارد حاصل از پلاسمید (99=% (r2 تعیین کمیت شدند. توانایی کمی سازی در این آزمایش در دامنه ی گسترده ی خطی ( 500 تا 105×6 کپی ) برای ارزیابی تعداد کپی های قطعه ی هدف از بافت طیور در نمونه های مثبت مورد ارزیابی قرار گرفت. معادله خطی رگرسیون با استفاده از استاندارد تقلب ترسیم گردید و درصد تقلب نمونه ها مشخص شد. نتایج کمیت سنجی نشان می دهد که روش real-time pcr می تواند به عنوان روشی دقیق و سریع بکار گرفته شود. کلید واژه ها: تشخیص کمی، پودر ماهی، بافت طیور، real-time pcr ، mtdna